簡要描述:
線粒體活性氧產生速率(ROS)測試盒包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等,研究表明,機體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。
更新時間:2024-09-02;廠商性質:經銷商;覽量:872
線粒體活性氧產生速率(ROS)測試盒
商品詳情:
測定意義:
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等,研究表明,機體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。
正常情況下,細胞內抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài),細胞內活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍;在病理情況下,細胞內抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破,細胞內活性氧水平過多?茀?
貨號 | 規(guī)格 | 檢測方法 |
YSH3486 | 100管/96樣 | 熒光法 |
測定原理:
熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜,在線粒體內被酯酶水解,形成無熒光的DCFH,DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據上述測定原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數(shù)據點擬合,線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。
需自備的儀器和用品:
多功?茀?
樣品中AA提取:
1.按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行室溫勻漿,然后轉移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。
2.細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3.血清等液體:直接檢測。
計算公式如下:
1、血清(漿)LAP活力的計算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細菌或細胞總數(shù),2000萬。
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注意事項:
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內使用完畢。
2. 為保證實驗結果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測定。
3. 與茚三酮反應在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。
4.檢出限為100μmol/L。