簡要描述:
乙醇酸氧化酶測試盒是植物光呼吸代謝中的關鍵酶,也是光下合成草酸的關鍵酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,對研究光呼吸代謝過程及其調(diào)控具有重要意義。
更新時間:2024-09-02;廠商性質(zhì):經(jīng)銷商;覽量:1031
乙醇酸氧化酶測試盒
商品詳情:
測定意義
乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.1)是植物光呼吸代謝中的關鍵酶,也是光下合成草酸的關鍵酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,對研究光呼吸代謝過程及其調(diào)控具有重要意義。
貨號 | 規(guī)格 | 檢測方法 |
YSH3506 | 100管/96樣 | 微量法 |
YSH3506-1 | 50管/48樣 | 紫外分光光度法 |
測定原理
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和鹽酸苯肼反應生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。
樣品中AA提取:
1.按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行室溫勻漿,然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。
2.細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3.血清等液體:直接檢測。
計算公式如下:
1、血清(漿)LAP活力的計算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細菌或細胞總數(shù),2000萬。
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注意事項:
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。
2. 為保證實驗結果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測定。
3. 與茚三酮反應在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。
4.檢出限為100μmol/L。