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α半乳糖苷酶(αGAL)測(cè)試盒

簡(jiǎn)要描述:

α半乳糖苷酶(αGAL)測(cè)試盒廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解,主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL對(duì)于植物種子的萌發(fā)至關(guān)重要,種子萌發(fā)初期,其催化產(chǎn)生的D-半乳糖通過糖酵解途徑迅速轉(zhuǎn)化和消耗,為種子的萌發(fā)提供最初的能量來源,后期則主要參與細(xì)胞壁儲(chǔ)藏多糖水解。

更新時(shí)間:2024-09-02;廠商性質(zhì):經(jīng)銷商;覽量:729

商品詳情:
α半乳糖苷酶(αGAL)測(cè)試盒測(cè)定意義:                          

α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解,主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL對(duì)于植物種子的萌發(fā)至關(guān)重要,種子萌發(fā)初期,其催化產(chǎn)生的D-半乳糖通過糖酵解途徑迅速轉(zhuǎn)化和消耗,為種子的萌發(fā)提供最初的能量來源,后期則主要參與細(xì)胞壁儲(chǔ)藏多糖水解。

貨號(hào)

規(guī)格

檢測(cè)方法

YSH3237

100管/48樣

微量法

YSH3237-1

50管/24樣

可見分光光度法

測(cè)定原理:

α-GAL分解對(duì)--α-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算α-GAL活性。

自備用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中AA提取:

1.按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行室溫勻漿,然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測(cè)。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

3.血清等液體:直接檢測(cè)。

計(jì)算公式如下:

1、血清(漿)LAP活力的計(jì)算:

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),2000萬。

注意事項(xiàng):

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4.檢出限為100μmol/L。

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抗壞血過氧化物酶(APX)比色法檢測(cè)試劑盒 紫外分光光度法 50管/48樣

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單脫氫抗壞血還原酶(MDHAR)比色法檢測(cè)試劑盒 紫外分光光度法 50管/48樣

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脫氫抗壞血還原酶(DHAR)比色法檢測(cè)試劑盒 紫外分光光度法 50管/48樣


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