簡(jiǎn)要描述:
二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)測(cè)試盒是植物光合作用中的一個(gè)關(guān)鍵酶,既控制著CO2的固定,同時(shí)又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流,其活性的大小直接影響著光合速率。
更新時(shí)間:2024-09-02;廠商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商;覽量:1058
二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)測(cè)試盒
商品詳情:
測(cè)定意義:
核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一個(gè)關(guān)鍵酶,既控制著CO2的固定,同時(shí)又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流,其活性的大小直接影響著光合速率。
貨號(hào) | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 |
YSH3288 | 100管/96樣 | 微量法 |
YSH3288-1 | 50管/48樣 | 紫外分光光度法 |
YSH3288-1 | 25管/24樣 | 紫外分光光度法 |
測(cè)定原理:
在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)與1分子的CO2結(jié)合,產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA),PGA可通過(guò)外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用,產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸,并使還原型輔酶I(NADH)氧化。因此,340nm吸光度的變化可計(jì)算還原型輔酶I氧化速率,還原型輔酶I氧化速率可反應(yīng)Rubisco的活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中AA提取:
1.按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行室溫勻漿,然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來(lái)水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3.血清等液體:直接檢測(cè)。
計(jì)算公式如下:
1、血清(漿)LAP活力的計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),2000萬(wàn)。
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超微量Ca2+Mg2+-ATP酶(測(cè)組織、普通細(xì)胞)測(cè)試盒/比色法50管/25樣
超微量Ca2+Mg2+-ATP酶(測(cè)組織、普通細(xì)胞)測(cè)試盒/比色法100管/50樣
超微量Ca-ATP酶(測(cè)紅細(xì)胞)測(cè)試盒50管/25樣
超微量Ca-ATP酶(測(cè)紅細(xì)胞)測(cè)試盒100管/50樣
超微量Ca-ATP酶(測(cè)組織、普通細(xì)胞)測(cè)試盒50管/25樣
超微量Ca-ATP酶(測(cè)組織、普通細(xì)胞)測(cè)試盒100管/50樣
超微量Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶(測(cè)紅細(xì)胞)測(cè)試盒150管/50樣
超微量Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶(測(cè)紅細(xì)胞)測(cè)試盒75管/25樣
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。
2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過(guò)高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。
3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰,因此,570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。
4.檢出限為100μmol/L。