elisa試劑盒白介素類實(shí)驗(yàn)中的封閉液小知識(shí)
ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn),蔗糖封閉的原理:
1、ELISA實(shí)驗(yàn)中,蔗糖本身沒有封閉作用;
2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保護(hù)ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護(hù)劑”的作用。
4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加,當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時(shí)進(jìn)行處理;那一種更好需要你實(shí)驗(yàn)后來驗(yàn)證。但多數(shù)選擇前者。
封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實(shí)驗(yàn)表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結(jié)合抗體或抗原的時(shí)候就不會(huì)產(chǎn)生非特異結(jié)合了,不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。
tween的作用:雖然不能單獨(dú)封閉,但和BSA在封閉時(shí)會(huì)起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用,假如抗體包被在板上會(huì)出現(xiàn)YY-
ELISA實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實(shí)驗(yàn),把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?1) ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(2) ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(2) ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(3) ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液;(4)ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7) ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液(8)ELISC。
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長(zhǎng)期保存。
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為了保證elisa試劑盒白介素類實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要,將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時(shí)候防止加入的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔,嚴(yán)防交叉污染。
* RT,避光 25克 順式-9-十八烯醇
* RT,避光 10克 二硫化芐
* RT 100克 4-(2-氨乙基)苯磺酰氯
* RT,避光 25克 N-R添加劑
* RT 5克 對(duì)稱二苯基偶氮羰酰肼
* 500克 膽酸(牛)
* 1公斤 去氫膽酸
* RT 10克 α-硫辛酸
* RT 25克 腦磷脂
* 25克 硅藻土G
* RT,避光 5克 丙烯酸
* 10克 間羥基苯甲酸
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