ELISA試劑盒進口大鼠反應(yīng)步驟。在建立進口ELISA試劑盒方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,實驗表明,兩次抗原 抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2 小時,產(chǎn)物的生成可達。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應(yīng),邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結(jié)果,將質(zhì)控放在非邊緣位置。96孔酶標板結(jié)構(gòu)特別;易產(chǎn)生邊緣效應(yīng),抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對溫度有嚴格要求,酶標板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同,造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異;干浴與水浴存在明顯的差異,盡可能使用水浴,并要求固相板放入水中,減少受熱不均,貼密封膜,防止污物浸入。
洗滌在ELISA試劑盒進口大鼠過程中雖不是一個,但卻決定著實驗的成敗。ELSIA試劑盒就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來??梢哉f在ELISA 操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴格按要求洗滌,不得馬虎。
⑴ 嚴格按照試劑說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30~60min。
⑵ 加樣后及時放人孵箱。標本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
(3)封板溫育時,各孔一定要封嚴,防止陽性標本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。
(4)用洗板機洗板時,保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,進口ELISA試劑盒這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。
(5)合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
(6)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
(7)顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
(8)加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
(9)應(yīng)保證酶標板清潔,整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板"降至zui低限度。ELISA試劑盒進口大鼠從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結(jié)果。