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ELISA試劑盒SCI文章洗滌次數(shù)的經(jīng)驗法則
更新時間:2018-01-02   點擊次數(shù):946次

ELISA試劑盒SCI文章影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然,洗滌次數(shù)越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會降低信號強度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過,ELISA板的商會對洗滌次數(shù)提出建議。一般而言,商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說,96孔板的每個孔能容納330至460 µl。不過,有些自動化洗板機可設(shè)置程序,分配遠遠超出這個量的洗滌液,比如1 ml。它是如何做到的呢?其實很簡單,就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說,隨著分液器分配更多的液體,抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量,但不會溢出到其他孔中。
抽吸
另外,還有一些參數(shù)會影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調(diào)整,以降低背景(殘留量)和差異。
殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體,它們會增加背景信號。殘留量越小,殘留液體越少,轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。
吸液高度會明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大,那就會讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部,那么也會使吸液效率降低,殘留量增加。
目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭:剛性和浮動的。浮動洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動,而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢谩J褂脛傂韵搭^的洗滌操作在優(yōu)化起來更為復(fù)雜,因為你需要非常仔細地調(diào)整吸液高度。如果你們實驗室使用幾種不同的板,那可能會很耗時。在使用浮動洗頭時,吸頭會降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要,因此洗頭會下降到底部。
抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個孔只使用一個抽吸點(這很常見,因為更快),那么ELISA試劑盒SCI文章抽吸的位置需要優(yōu)化。*的位置取決于洗頭的性狀,但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間,即使這是所有洗頭zui常見的默認位置。一般來說,*位置在孔中間與孔壁之間的某處。
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