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PCR核酸檢測(cè)試劑盒是怎么利用PCR技術(shù)完成檢測(cè)的?
更新時(shí)間:2022-11-26   點(diǎn)擊次數(shù):771次
  PCR核酸檢測(cè)試劑盒是怎么利用PCR技術(shù)完成檢測(cè)的? 
  PCR核酸檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理是以病毒*的基因序列為檢測(cè)靶標(biāo),通過PCR擴(kuò)增,使我們的選擇這段靶標(biāo)DNA序列指數(shù)級(jí)增加,每一個(gè)擴(kuò)增出來的DNA序列,都可與我們預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合,產(chǎn)生熒光信號(hào),擴(kuò)增出來的靶基因越多,累計(jì)的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。所以,核酸檢測(cè),其實(shí)就是通過檢測(cè)熒光信號(hào)的累積來確定樣本中是否有問題。
  PCR核酸檢測(cè)試劑盒,PCR就是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR),可使特定DNA的片段進(jìn)行體外快速擴(kuò)增。什么意思呢?就是用PCR技術(shù),可以把一段DNA序列成千上萬倍地復(fù)制粘貼。就是“變性、退火、延伸”這三個(gè)步驟的不斷循環(huán)。
  具體來說,這三個(gè)步驟的實(shí)現(xiàn)方法是:
  1、變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;
  2、退火:退火也叫復(fù)性,模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,在這個(gè)溫度下,模板DNA單鏈能夠與引物的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;所謂引物,是一段已經(jīng)確定好DNA的片段,通過引物找到模板DNA的相應(yīng)位置,也就是確定了復(fù)制的起點(diǎn);
  3、延伸:DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP(脫氧核糖核苷三磷酸,可構(gòu)成DNA)為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則和半保留復(fù)制原理,就能合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的復(fù)制鏈。
  PCR核酸檢測(cè)試劑盒通過提取樣本中的RNA,通過PCR技術(shù),先逆轉(zhuǎn)錄形成DNA,再對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增,最后以熒光的方式讀取信號(hào)。如果PCR檢測(cè)到足夠強(qiáng)的信號(hào),那么就可以說樣本中存在問題,反之則說明沒有問題。
 

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