改良熒光探針pcr試劑盒準備試劑與收集血樣：

雙重核酸試劑盒（熒光PCR法）　1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

9.  30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

性能：

1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0.1 U/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6個月

營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基

亞碲酸鉀(慶大霉素瓊脂凍干配套試劑)

亞碲酸鉀(四號瓊脂凍干配套試劑)

3%氯化鈉三糖鐵瓊脂

Cary-Blair氏運送培養(yǎng)基（不含瓊脂）

Cary-Blair氏運送培養(yǎng)基

60g/L氯化鈉蛋白胨水(PW)

慶大霉素瓊脂

3%氯化鈉溶液

我妻氏血瓊脂

3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂

堿性瓊脂

四號瓊脂

TCBS瓊脂

緩沖-甘油氯化鈉溶液

3%氯化鈉堿性蛋白胨水

堿性蛋白胨水

SCDLP液體培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基）

含鐵牛奶培養(yǎng)基