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ELISA試劑盒做標(biāo)準曲線樣品檢測時的注意事項
更新時間:2020-11-27   點擊次數(shù):785次
  ELISA試劑盒檢測方法的局限性:
 ?、?樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);
  ②樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
 ?、坳栃詫φ?、擴增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;
 ?、懿≡w在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
 ?、莶煌奶崛》椒ù嬖谔崛⌒什町?,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
 ?、拊噭┻\輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果
  樣本采集、存放及運輸:
  1、費用樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
  2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
  3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
  ELISA試劑盒做標(biāo)準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意
  1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準曲線計算出來的,所以首先要把做標(biāo)準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
  2、設(shè)置標(biāo)準曲線樣品的標(biāo)準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標(biāo)準曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
  3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準曲線中的標(biāo)準樣品濃度,這樣就能夠保證標(biāo)準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
  4、檢測標(biāo)準樣品時,應(yīng)按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
  5、標(biāo)準曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。
  6、做出的標(biāo)準曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎樱话銇碚f,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999.
 

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