利用雜交瘤技術制備單克隆抗體(McAb)基本原理是根據(jù)三個原則:(1)淋巴細胞產(chǎn)生抗體的克隆選擇學說;(2)雜交瘤細胞保持雙方親代細胞特性化;(3)然后大量培養(yǎng)增殖,制備所需的McAb。
克隆抗體的產(chǎn)生
1. 動物體內誘生方法:目前McAb治療用或體外診斷用的多數(shù)尚采用這一方法制備。先在小鼠腹腔注射液體石蠟或福氏不*佐劑,一周后將雜交瘤細胞懸液注射腹腔,1~2周后,無菌抽取腹水,離心取上清液即可。
2.體外培養(yǎng)法:這是實驗室制備的方法。將雜交瘤細胞置培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),待培養(yǎng)液顏色改變或細胞過多開始死亡時,收集上清液,離心去掉碎片及細胞即可。另一種是雜交瘤細胞高密度培養(yǎng)法。
克隆抗體的純化及鑒定
目前常用的純化方法有鹽析、凝膠過濾、離子交換層析和辛酸提取等方法。
克隆抗體性質鑒定方法如放免測定、補體介導溶血試驗、ELISA、免疫酶、玫瑰花結形成試驗等,zui常用的為ELISA方法,一般先作定性試驗,如陽性,進一步作定量檢測。